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CY7-Angiogenin,CY7.5標(biāo)記血管生成素的合成過程
CY7-Angiogenin 是通過將血管生成素(Angiogenin,一種小型核糖核酸酶蛋白)與近紅外熒光染料 CY7 偶聯(lián)形成的標(biāo)記蛋白。偶聯(lián)后的蛋白兼具熒光可視化能力和生物功能,為細(xì)胞生物學(xué)、血管生成研究及分子追蹤提供實驗平臺。
合成過程:蛋白質(zhì)預(yù)處理
將 Angiogenin 溶解于緩沖液(如 PBS, pH 7.4)中,控制濃度以保持蛋白穩(wěn)定性。
若蛋白質(zhì)含有自由巰基,可通過適當(dāng)?shù)谋Wo或活化處理避免非特異偶聯(lián),確保結(jié)構(gòu)完整性。
CY7 活化與偶聯(lián)
CY7 通常以 NHS 酯或 Maleimide 活化形式存在,可與蛋白質(zhì)賴氨酸氨基或巰基反應(yīng)形成共價鍵。
偶聯(lián)在弱堿性緩沖條件(pH 7–8)下進(jìn)行,溫和攪拌若干小時,確保偶聯(lián)效率與蛋白活性兼顧。
通過調(diào)節(jié) CY7 與 Angiogenin 摩爾比,可控制熒光標(biāo)記密度,避免過度修飾影響生物功能。
反應(yīng)終止與穩(wěn)定化
偶聯(lián)完成后,加入羥胺或類似封閉試劑終止未反應(yīng)的活性酯。
保持低溫條件和適宜緩沖體系,確保標(biāo)記蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。
純化過程:
去除未反應(yīng)染料
采用透析或凝膠過濾去除低分子量雜質(zhì)及未反應(yīng)的 CY7。
維持溶液 pH 和溫度,避免蛋白聚集。
高精度分離
對于要求高純度的實驗,可使用 HPLC(反相或尺寸排阻)分離均一產(chǎn)物。
熒光檢測可用于監(jiān)控標(biāo)記蛋白分離效果與純化效率。
表征與驗證
紫外-可見光譜與熒光光譜用于確認(rèn) CY7 偶聯(lián)成功。
質(zhì)譜分析驗證蛋白與染料的偶聯(lián)效率和化學(xué)均一性。
活性實驗確保 Angiogenin 的核糖核酸酶功能及血管生成相關(guān)活性未受影響。
產(chǎn)品名稱:CY7-Angiogenin,CY7.5標(biāo)記血管生成素
純度:95%+
規(guī)格:mg/g
用途:科研
狀態(tài):固體/粉末/溶液
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