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5-FITC-PEG3-Amine(NH2-PEG3-FITC)是一種常用于生物標記和偶聯(lián)的熒光探針結(jié)構(gòu),廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)標記、細胞成像、傳感器開發(fā)和材料表面修飾等領(lǐng)域。我們提供這個產(chǎn)品,僅供科研,如有需要,歡迎咨詢!
其結(jié)構(gòu)包括5位異硫氰酸熒光素(FITC)通過三聚乙二醇(PEG3)鏈連接至一個伯胺基團。該分子結(jié)構(gòu)中既具有水溶性PEG鏈,又包含親核反應(yīng)活性的NH2和熒光功能基團,使其在生物體系中應(yīng)用廣泛。然而,在合成過程中,常存在未反應(yīng)的FITC、側(cè)產(chǎn)物或過量試劑殘留,需通過高效純化手段獲得高純度產(chǎn)物以確保后續(xù)生物實驗的可靠性。
純化NH2-PEG3-FITC的關(guān)鍵在于分離出游離FITC與反應(yīng)未完成的中間體。通常采用的方法包括:
1. 膜過濾與透析法:
適用于分子量差異較大的體系,使用MWCO(分子量截斷)為1–3 kDa的透析袋可有效去除小分子FITC殘留,保留PEG連接的大分子。此方法適合水溶液體系,溫和不破壞熒光基團,但純化效率較低且耗時較長。
2. 高效液相色譜(HPLC):
采用反相C18柱配合梯度洗脫(如水/乙腈+0.1% TFA),可以實現(xiàn)對FITC、PEG鏈以及目標產(chǎn)物的精細分離。HPLC具有分離度高、檢測靈敏的優(yōu)點,是純化NH2-PEG3-FITC的主流手段,尤其適合對產(chǎn)物純度要求極高的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。
3. 硅膠柱層析(Flash Chromatography):
適用于中等規(guī)模合成。利用NH2-PEG3-FITC的極性差異,通過極性溶劑(如MeOH/DCM)逐步洗脫,可有效去除非極性副產(chǎn)物。為避免熒光基團降解,建議在避光條件下操作。
4. 分液提取與重結(jié)晶:
FITC過量時會在有機溶劑中游離存在,可采用有機-水分層提取分離。配合調(diào)節(jié)pH(如酸化水層)可進一步促進FITC在特定相中的分布,增強純化效果。但對于PEG鏈較短或極性相近的結(jié)構(gòu),此方法效果有限。
純化后需通過UV-Vis、熒光光譜和質(zhì)譜(如MALDI-TOF或ESI-MS)驗證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與純度。FITC的最大吸收波長約為495 nm,發(fā)射波長為520 nm,測定其熒光強度可判斷是否存在自由FITC殘留。
綜上,NH2-PEG3-FITC的純化是確保其在生物標記和功能修飾中成功應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。結(jié)合透析、HPLC與光譜驗證的綜合方法可有效提升其純度與產(chǎn)率,為高效、精準的生物標記提供保障。
【基本信息】:
包裝:瓶裝,采用高密封防潮材質(zhì),確保產(chǎn)品穩(wěn)定性
產(chǎn)地:中國·西安
用途:科研實驗使用
產(chǎn)品性質(zhì):高純度(≥95%)
儲藏條件:建議冷藏保存
規(guī)格可選:50mg、100mg、250mg、500mg(可按需定制包裝)
使用建議:開封后盡快使用,避免反復(fù)凍融;使用前請充分溶解并混勻
溫馨提示:本產(chǎn)品僅供科研使用,不可用于人體或動物臨床實驗!
【關(guān)于我們】:
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