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CY7.5-Filamin，CY7.5標記絲狀蛋白的反應機理概述

CY7.5-Filamin 是通過將絲狀蛋白（Filamin，一類多功能細胞骨架蛋白，分子量約 280–320 kDa）與近紅外熒光染料 CY7.5 偶聯(lián)形成的功能化蛋白分子。Filamin 蛋白由多個 Ig 樣結(jié)構(gòu)域組成，含有豐富的賴氨酸、半胱氨酸及羧基殘基，為化學偶聯(lián)提供多種活性位點。CY7.5 偶聯(lián)賦予其熒光追蹤功能，可在細胞骨架研究和活體成像中發(fā)揮作用。

反應機理概述：
蛋白活性位點識別
CY7.5 標記通常依賴于活化羧基（如 CY7.5-NHS ester）與蛋白的賴氨酸 ε-氨基形成穩(wěn)定酰胺鍵。絲狀蛋白表面的賴氨酸殘基提供了理想的偶聯(lián)位點，而半胱氨酸殘基則可通過馬來酰亞胺或二硫鍵衍生物進行特異性偶聯(lián)。
偶聯(lián)反應機理
CY7.5-NHS ester 通過親核攻擊機制與賴氨酸側(cè)鏈氨基反應。具體步驟如下：
NHS 酯碳原子被賴氨酸氨基進攻，形成四面體過渡態(tài)。
過渡態(tài)中，NHS 基團離開，形成穩(wěn)定的酰胺鍵，將 CY7.5 共價連接至蛋白表面。
這一反應為共價修飾，確保標記穩(wěn)定且熒光信號可靠。
水相與緩沖體系作用
反應通常在中性至弱堿性緩沖液（pH 7–8）中進行，以保證賴氨酸氨基的親核性，同時保持蛋白構(gòu)象。緩沖液中避免含初級胺或巰基競爭物，以免降低偶聯(lián)效率。
偶聯(lián)度調(diào)控
通過調(diào)節(jié) CY7.5 與 Filamin 的摩爾比（1:1–1:5）以及反應時間，可控制標記數(shù)量，兼顧熒光強度和蛋白功能保留。過度標記可能影響蛋白折疊和與細胞骨架結(jié)合功能。
純化與表征
偶聯(lián)完成后，通過透析、凝膠過濾或超濾去除游離染料。SDS-PAGE、紫外-可見吸收和熒光光譜用于驗證偶聯(lián)成功，蛋白功能測定可確保 Filamin 活性未受影響。
產(chǎn)品名稱：CY7.5-Filamin，CY7.5標記絲狀蛋白
純度：95%+
規(guī)格：mg/g
用途：科研

狀態(tài)：固體/粉末/溶液

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僅用于科研，不能用于人體。小編axc