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DAF-2DA，全稱為 4,5-diaminofluorescein-2-diacetate，是另一種經(jīng)典 NO 探針。與 DAF-FM 不同的是，DAF-2DA 通過二乙酸酯（diacetate）修飾，使其能夠透過細胞膜，進入細胞后被胞內(nèi)酯酶水解。
常用名 4,5-二氨基熒光素二乙酸酯
英文名 4,5-Diaminofluorescein diacetate
CAS號 205391-02-2
分子量 446.409
密度 1.5±0.1 g/cm3
沸點 719.0±60.0 °C at 760 mmHg
分子式 C24H18N2O7
熔點 N/A
閃點 320.0±29.2 °C
作用機理
DAF-2DA 進入細胞后，經(jīng)胞內(nèi)酯酶水解，去除乙酸酯基，生成親水性的 DAF-2。隨后，DAF-2 可與 NO 的氧化中間體（如 N2O3）反應(yīng)，形成苯并三唑類熒光產(chǎn)物，從而顯著增強綠色熒光信號，實現(xiàn)對細胞內(nèi) NO 的檢測。
應(yīng)用領(lǐng)域
細胞內(nèi) NO 成像
DAF-2DA 是研究 NO 生成和分布的常用細胞探針，可在熒光顯微鏡下實時觀察細胞內(nèi) NO 的動態(tài)變化。
組織與活體研究
由于其細胞通透性良好，也可用于組織切片或動物模型中 NO 的檢測。
信號通路研究
NO 在神經(jīng)傳導(dǎo)、免疫調(diào)控、血管擴張等生理過程中扮演重要角色，DAF-2DA 可幫助研究這些信號通路中的 NO 動態(tài)。
優(yōu)勢
細胞膜通透性強，可直接進入細胞。
與 NO 的反應(yīng)靈敏，背景干擾低。
熒光增強明顯，便于定性和定量檢測。
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