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iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽是一種結(jié)合了高性能熒光染料iFluor 488與鬼筆環(huán)肽（α-amanitin或其類似環(huán)肽毒素）分子的復(fù)合物。
偶聯(lián)原理與合成方法
iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽通常通過化學(xué)方法將iFluor 488活性衍生物（如iFluor 488 NHS酯或Maleimide）與鬼筆環(huán)肽上的特定位點（如氨基、巰基）進(jìn)行共價偶聯(lián)。偶聯(lián)反應(yīng)的要點包括：
選擇合適的反應(yīng)位點：保證偶聯(lián)不影響鬼筆環(huán)肽的生物活性；
溫和的反應(yīng)條件：在pH 7–9的緩沖液中進(jìn)行，避免蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變性；
純化步驟：通過高效液相色譜（HPLC）等方法去除未反應(yīng)染料和副產(chǎn)物；
鑒定確認(rèn)：質(zhì)譜、紫外-可見光譜及熒光光譜確認(rèn)偶聯(lián)成功及純度。
應(yīng)用領(lǐng)域
1. 細(xì)胞定位與成像
iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽能特異性結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的RNA聚合酶II，通過熒光顯微鏡觀察其分布，幫助研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控和細(xì)胞核內(nèi)蛋白復(fù)合物的空間動態(tài)。
2. 蛋白-蛋白相互作用研究
結(jié)合免疫共沉淀等技術(shù)，標(biāo)記后的鬼筆環(huán)肽可用于檢測與RNA聚合酶II相關(guān)蛋白的相互作用，揭示細(xì)胞內(nèi)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
3. 細(xì)胞活性及毒性分析
由于鬼筆環(huán)肽的細(xì)胞抑制特性，該標(biāo)記物可用于分析細(xì)胞內(nèi)毒性機(jī)制，輔助藥物篩選和抗癌機(jī)制研究。
4. 多色熒光成像
iFluor 488的綠色熒光便于與紅色、遠(yuǎn)紅色等多種染料聯(lián)合使用，實現(xiàn)多標(biāo)記、多通道活細(xì)胞成像。
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